1 材料与方法1.1 实验仪器XA-1型固体样品粉碎机:江苏金坛亿通电子有限公司;ZK072型电热真空干燥箱:上海实验仪器总厂;AEL-精密天平:湘仪天平仪器设备厂;PHS-25型酸度计:上海雷磁精密科学仪器有限公司;LD4-2A高速离心机;S11-4型数显电热恒温水浴锅:郑州长城科公贸公司。1.2 材料与试剂核桃仁:购于农贸市场;中性蛋白酶 (活力30 000 U/g) :北京房山酶制剂总厂;石油醚、乙醚、浓盐酸、Na OH等均为分析纯。1.3 实验方法1.3.1 原料预处理将原料核桃仁置于电热真空干燥箱在75℃下进行烘干, 2 h后取出, 并用手撕去核桃仁外皮, 将处理好的核桃仁粉碎成粉末。1.3.2 测定方法核桃仁油脂含量的测定:采用索氏抽提法, 参照GB/T 5009.6-2003。以水酶法提取的核桃油与索氏提取的核桃油含量进行比较, 计算公式如下:                                                                              1.3.3 工艺流程原料核桃仁→烘干→去皮→磨粉→水酶法取油→灭酶→离心分离→乳化油→过滤→溶剂萃取→蒸发溶剂→烘干至恒重→核桃油。1.3.4 操作要点称取10 g经过预处理的核桃仁粉, 按比例加入去离子水, 用Na OH溶液调节pH值, 置于恒温水浴锅预煮1 h, 再按5%比例加入中性蛋白酶, 恒温下酶解, 取出灭酶。水酶法处理经机械破碎的核桃仁, 由于核桃油本身的极性与黏性, 以及亲水亲脂蛋白的存在, 使得本来不相溶的油脂、水连在一起, 不易于彻底分离, 形成乳化油。所以必须破乳, 破乳的方法很多, 如调节体系pH值, 离心分离, 萃取等。离心分离后上清液用100目纱布过滤, 以除去离心后浮于表面的核桃粉膜。将过滤得到的清液用石油醚萃取核桃油, 并用石油醚清洗纱布和离心管下层滤渣, 合并3次所得的溶液于100 m L烧杯中, 移入分液漏斗, 进行核桃油的萃取。分离得到上层有机层, 置于恒温水浴锅中85℃加热, 使石油醚蒸发回收至无石油醚气味。放入干燥箱恒重, 得到核桃油粗油。1.4 实验设计1.4.1 提取时间对提取率的影响分别称取10 g经粉碎的核桃仁粉, 加入60 m L蒸馏水 (1∶6料水比) , 调节pH值为7.0, 置于恒温90℃水浴锅下预煮1 h, 再按照5%比例加入中性蛋白酶, 于45℃的恒温水浴锅中分别加热3、4、5、6、7 h后, 煮沸灭酶10 min, 用离心机在4 000 r/min下离心10 min, 取油水层, 石油醚萃取, 再回收石油醚, 烘干至恒重, 称取油净重量。1.4.2 料水比对提取率的影响分别称取10 g经粉碎的核桃仁粉, 调节料水比为1∶4、1∶5、1∶6、1∶7、1∶8, 调节pH值为7.0, 置于恒温90℃水浴锅下预煮1 h, 再按照5%比例加入中性蛋白酶, 于45℃的恒温水浴锅中分别加热5 h后, 煮沸灭酶10 min, 用离心机在4 000 r/min下离心10 min, 取油水层, 石油醚萃取, 再蒸发石油醚, 烘干至恒重, 称取油净重量。1.4.3 提取温度对提取率的影响分别称取10 g经粉碎的核桃仁粉, 加入60 mL蒸馏水 (1∶6料水比) , 调节pH值为7.0, 置于恒温90℃水浴锅下预煮1 h, 再按照5%比例加入中性蛋白酶, 分别于35、40、45、50、55℃的恒温水浴锅中加热5 h, 后处理方法同上。1.4.4 pH值对提取率的影响分别称取10 g经粉碎的核桃仁粉, 加入60 m L蒸馏水 (1∶6料水比) , 调节pH值分别为5.0、5.5、6.0、6.5、7.0, 置于恒温90℃水浴锅下预煮1 h, 再按照5%比例加入中性蛋白酶, 分别于45℃的恒温水浴锅中加热5 h, 后处理方法同上。2 结果与讨论